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前言
離子交換色譜法是一種重要的生物化學(xué)分離技術(shù),它基于帶電分子與固定相之間的相互作用,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分析,使得通過酸堿變體推導(dǎo)蛋白相關(guān)降解途徑成為可能,并為相關(guān)的質(zhì)量控制和分子優(yōu)化提供指導(dǎo)數(shù)據(jù)。而在蛋白質(zhì)分析過程中,離子交換色譜法方法開發(fā)是非常困難的,這受困于每個(gè)蛋白的空間結(jié)構(gòu)和氨基酸排列截然不同,這種跳躍式的變化使得每種蛋白擁有不同的等電點(diǎn)與唾液酸或糖基化程度,這大大增加相關(guān)方法開發(fā)的困難程度,此開發(fā)的關(guān)鍵步驟包括多步:選擇合適的離子交換介質(zhì)、優(yōu)化緩沖體系、確定洗脫條件、調(diào)整流速和柱溫等。這些步驟確保了離子交換色譜法在蛋白質(zhì)分析中的有效性和可靠性,但繁瑣的方法開發(fā)步驟也為試驗(yàn)帶來極大的時(shí)間成本,間接的增加投入成本,且伴隨著方法開發(fā)失敗的風(fēng)險(xiǎn),這成為蛋白藥物分析領(lǐng)域迫在眉睫的問題。舟帆生物已經(jīng)開發(fā)出關(guān)于離子交換色譜法的通用流動(dòng)相,并取得了令人鼓舞的進(jìn)展。
由于樣品中各組分的電荷性質(zhì)、大小、形狀和疏水性等都會(huì)影響離子交換色譜的過程和結(jié)果,選擇合適的離子交換介質(zhì)和緩沖體系尤為重要。離子強(qiáng)度、pH值、溫度和流速等色譜條件的優(yōu)化需要通過實(shí)驗(yàn)來確定,并且離子交換色譜法中離子強(qiáng)度和pH值的微小變化都可能導(dǎo)致分離效果的顯著差異。在日常配制關(guān)于離子交換色譜法流動(dòng)相時(shí)精確控制這些參數(shù)是實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定和重復(fù)性分離的關(guān)鍵。然而,在實(shí)際操作中,由于緩沖液的制備和使用過程可能會(huì)引入誤差,通常導(dǎo)致色譜峰保留時(shí)間的遷移等問題。為了解決上述問題,舟帆生物自主開發(fā)并優(yōu)化出了一款用于離子交換色譜法的通用流動(dòng)相,該產(chǎn)品綜合考慮了分析成本和時(shí)間效率,在離子色譜方法開發(fā)過程中兼具了分離效率、分析時(shí)間和成本,提供了一種高效、經(jīng)濟(jì)且通用的離子交換色譜流動(dòng)相的選擇。
材料與方法
儀器、色譜柱
安捷倫1260 高效液相色譜系統(tǒng)
ThermoProPac? WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色譜柱
樣品
實(shí)驗(yàn)中用到的樣品包括8個(gè)蛋白藥物樣品均來自合作方浙江大學(xué)藥學(xué)院生物藥制劑與分析團(tuán)隊(duì)。
IEC-HPLC參數(shù)
下表列出了使用ZF-LC-0002流動(dòng)相A&B(10×)進(jìn)行IEC-HPLC液相分析的色譜參數(shù):
實(shí)驗(yàn)參數(shù)
將8種蛋白稀釋到1mg/mL,并使用CpB酶酶切,酶切后的樣品10000 rmp/min離心十分鐘取上清液進(jìn)樣檢測(cè)。
結(jié)果
見圖1。
圖1. 8 種蛋白藥物的IEC-HPLC 色譜圖
結(jié)論
開發(fā)出一種離子交換色譜法通用的流動(dòng)相,在8種蛋白藥物樣品的分析中使用簡(jiǎn)單的洗脫條件即可對(duì)蛋白分子的酸性變體和堿性變體達(dá)到較好的分離,為離子交換色譜法相關(guān)的方法開發(fā)提供了一項(xiàng)優(yōu)異選項(xiàng),可以為企業(yè)和相關(guān)研究單位大大縮短方法開發(fā)時(shí)間和投入。
產(chǎn)品訂購信息
貨號(hào) |
品名 |
規(guī)格 |
ZF-LC-0002 |
IEC-HPLC通用流動(dòng)相(10×) |
盒(含A液、B液各1000mL) |
試用申請(qǐng)
IEC-HPLC通用流動(dòng)相試用裝火熱申請(qǐng)中,如您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣,請(qǐng)關(guān)注“西美杰微信公眾號(hào)”,發(fā)送關(guān)鍵詞“IEC”,填寫問卷即可獲得免費(fèi)試用機(jī)會(huì),數(shù)量有限,先到先得!
品牌介紹
北京西美杰科技有限公司是舟帆生物總代理,始終秉承著專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。如果您對(duì)上述產(chǎn)品感興趣,歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站m.jiuwulong.cn了解更多產(chǎn)品信息。